MagSA20UM 应用过程示例

一、试剂、器材

1. 缓冲液：以下为常用的缓冲液及其组成，可根据需要调整

Buffer I (结合生物素化核酸)：10 mM Tris-HCl (pH 7.4)，1.0 mM EDTA，1.0 M NaCl，0.01%~0.1% Tween-20

Buffer II (结合生物素化抗体/蛋白)：20 mM 磷酸钠， pH 7.4，含0.05% Tween-20，如需要，缓冲液中可添加0.01%~0.1% BSA

2. 基本器材：磁分离器、漩涡振荡器、移液器、吸头、(EP)试管、四维旋转混合仪、冰箱

3. 磁珠用量：据实验目的及待分离对象分子量，确定磁珠对生物素化成分的用量比例。

二、结合生物素化核酸

1. 取样：将链亲和素磁珠温和漩涡振荡20 s 重悬均匀；取100 μL 磁珠悬液到试管中，用磁分离架分离磁珠(试管置于磁分离架上1 min 以上，再用移液器尽可能去上清液)；备注：需要据待结合生物素化分子的量及大小，参考产品信息表中数据，确定磁珠用量。

2. 洗涤：1.0 mL Buffer I 与磁珠混匀，密闭试管，温和重悬磁珠；磁力分离去上清液；备注：当步骤1 取用磁珠体积大于1.0 mL 时，加入与磁珠体积相同的Buffer I。

3. 再洗涤：重复“步骤2”，再洗涤磁珠两次；

4. 吸附：Buffer I 稀释生物素化核酸0.50 mL 与洗涤后链亲和素磁珠混匀(磁珠~2 g/L)，温和充分重悬链亲和素磁珠；将混合物在四维旋转混合仪上，室温混合吸附~30 min；

5. 去除未结合成分：磁力分离保留磁珠；如需要，测定上清液中未结合的核酸量；

6. 再洗涤：按“步骤2”所述的方法，洗涤结合了核酸的链亲和素磁珠三次；

7. 测量：测定吸附反应前后上清液中核酸浓度，计算被磁珠结合核酸量；

8. 完成：根据后续实验要求，加入合适的缓冲液重悬磁珠，备用。

三、结合生物素化蛋白(抗体)

1. 取样：将链亲和素磁珠温和漩涡振荡20 s 重悬均匀；取100 μL 磁珠悬液到试管中；磁力分离保留链亲和素磁珠，用移液器吸去上清液；

备注：需要据待分离生物素化分子的量及大小，参考产品信息表中数据，确定磁珠需要量。

2. 洗涤：将1.0 mL Buffer II 与试管中磁珠混匀；磁力分离，移去上清液；

备注：当步骤1 取用磁珠体积大于1.0 mL 时，加入与磁珠体积相同的Buffer II。

3. 再洗涤：重复“步骤2” 两次，再洗涤链亲和素磁珠两次；

4. 吸附：将1.0 mL 用Buffer II 稀释生物素化蛋白与洗涤后链亲和素磁珠混匀(磁珠浓度

达1.0 mg/mL)，温和充分振荡重悬；在四维旋转混合仪上，将混合物室温混合~30 min；

5. 去除未结合成分：磁力分离保留磁珠，将上清液转移至新的离心管；

6. 洗涤：按“步骤2”的方法，用缓冲液洗涤结合蛋白的链亲和素磁珠3 次以上；

7. 测量：测定吸附反应前后上清液中蛋白浓度，计算被磁珠结合蛋白量；

8. 完成：据后续实验要求，加入Buffer II 或其他合适缓冲液重悬磁珠，备用。

提示

1. 冷冻、干燥和离心都造成磁珠团聚而无法再分散，失去效用；

2. 磁珠用前需重悬均匀，切忌剧烈震荡产生气泡导致蛋白变性；

3. 移液器吸头和反应管需避免因粘附磁珠而造成磁珠损失；

4. 产品保存液中含剧毒成分，避免吞咽，必须远离儿童；

5. 本产品严禁用于人体，可用于研究及体外诊断；

6. 用蛋白G纯化的标记检测抗体，信噪比会更高。